Риф абс что это
Диагностика сифилиса РИФ
Диагностика сифилиса: Реакция иммунофлюоресценции (РИФ)
Подготовка к исследованию:
Тип биоматериала: венозная кровь
Синонимы (rus): Реакция иммунофлуоресценции, РИФ-10, РИФ-200, РИФ-абс
Синонимы (eng): FTA — Fluorescent treponemal antibody
Методы исследования: ИФА (иммуноферментный анализ)
Сроки выполнения: 5 дней
Суть исследования, как оно проводится?
Иммунофлуоресцентная методика основана на взаимодействии АТ (антител) сыворотки исследуемого человека с АГ (антигенами) бледной трепонемы (заранее приготовленная зараженная биологическая жидкость кролика). К этому материалу добавляют специальную антивидовую флюоресцирующую сыворотку и осматривают под люминесцентным микроскопом. Если в крови человека находятся антитела к трепонеме, то наблюдается специфическое свечение крови в местах их нахождения.
Кровь берут утром натощак из вены. Метод точный, нет необходимости проводить предварительную специальную подготовку. Но чтобы не было ложноположительной реакции вечером накануне следует полностью исключить из употребления алкоголь и жирную пищу.
Кого направляют на РИФ диагностику?
Обследование проводится для определенного контингента людей или по показаниям. В каких случаях человека направят на РИФ сифилиса? Основное показание — положительная реакция микропреципитации при прохождении:
Расшифровка данных анализа
Оценивают результат спустя двое-трое суток. Используют систему четырех плюсов. Положительной считается реакция при наличии четырех (++++), трех (+++) и двух (++) плюсов. Минус и один плюс — реакция отрицательная.
РИФ наиболее точный анализ, который помогает выявить заболевание на любой стадии, начиная со 2-4 недели предполагаемого инфицирования человека. Такой метод часто используют для уточнения наличия инфекции в организме, если другие исследования дали положительный результат или при наличии явных признаков болезни.
Трепонемные тесты
Реакция иммобилизации бледных трепонем (РИБТ). Обязательным условием является исключение перед обследованием приема больным антибиотиков, которые оказывают токсическое действие на бледные трепонемы, вызывая их неспецифическое обездвижение.
Положительные результаты РИБТ обнаруживаются примерно с середины вторичного свежего периода сифилиса, и могут длительно сохраняться после проведенного лечения. При необходимости метод используют для выявления АТ в СМЖ, это исследование отличает высокая специфичность, но низкая чувствительность (около 40 %).
РИБТ мало пригодна для диагностики ранних форм сифилиса ввиду позднего (не ранее 8–9 недель от момента заражения) появления АТ-иммобилизинов; метод может давать ложноположительные результаты, в особенности у больных с аутоиммунной патологией, злокачественными заболеваниями, диабетом. Кроме того, РИБТ – достаточно сложный, трудоемкий и дорогостоящий анализ, требующий высокой квалификации персонала и наличия вивария, в связи с чем в последние годы он используется лишь в отдельных лабораториях. В диагностике РИБТ применяется как реакция-арбитр при расхождении результатов других серологических исследований, для дифференцирования ложноположительных результатов и при установлении диагноза поздних форм сифилиса.
Реакция связывания комплемента с трепонемным антигеном (РСК с ТА).Чувствительность метода – около 80 %, специфичность – 98 %. Метод входил в состав комплекса стандартных серологических реакций на сифилис, регламентированного приказом Минздрава СССР № 1161 от 02.09.1985 «О совершенствовании серологической диагностики сифилиса». В настоящее время использование этой реакции, как и РСК с кардиолипиновым антигеном, ограничено отдельными лабораториями.
Реакция иммунофлуоресценции (РИФ). Для диагностики сифилиса используют несколько модификаций РИФ: РИФ-ц – для выявления АТ в СМЖ, РИФ-200 (тестируемую сыворотку перед реакцией разводят в 200 раз); РИФ-абс (РИФ с абсорбцией), IgM-РИФ-абс (для определения АТ IgM). По чувствительности и специфичности РИФ-абс не уступает РИБТ, но выполнение этого метода намного проще. Результаты РИФ-абс становятся положительными с 3–й недели после заражения (до появления твердого шанкра или одновременно с ним), это метод ранней диагностики сифилиса. Нередки положительные результаты исследования спустя много лет после полноценного лечения раннего сифилиса, а у больных с поздним сифилисом – на протяжении десятилетий.
Показания для выполнения РИФ-абс:
IgM–РИФ–абс применяют для раздельного выявления АТ классов Ig, что представляет особый интерес при диагностике врожденного сифилиса, когда АТ к трепонеме, синтезированные в организме ребенка, представлены IgM, а АТ IgG имеют материнское происхождение. Показаниями к проведению этого исследования являются: диагностика врожденного сифилиса; оценка результатов лечения раннего сифилиса.
РИФ обладает высокой чувствительностью (98,5%) и специфичностью (99,6%) практически при всех формах сифилиса. Недостатками РИФ являются: невозможность автоматизации исследования и учета результатов; трудности приготовления качественного антигена из взвеси бледных трепонем, полученных из яичка зараженного кролика; субъективизм в оценке результатов.
Реакция пассивной гемагглютинации (РПГА). Сопоставление результатов, полученных при использовании РПГА и РИБТ, РИФ–абс, КСР, МРП показало высокую чувствительность и специфичность РПГА при диагностике сифилиса, совпадающую с результатами РИФ–абс.
РПГА может быть выполнена в качественном и количественном вариантах, существуют их макро- и микромодификации. Количественный метод РПГА позволяет оценить концентрацию специфических трепонемных АТ в крови. Титры от 1 : 640 и ниже характерны для пациентов, леченных по поводу сифилиса в прошлом. Более высокие титры – обычно для активной нелеченной инфекции.
Положительные результаты РПГА, как правило, отмечают спустя 3 недели после появления твердого шанкра и далее у пациентов, перенесших сифилис, в течение многих лет, нередко пожизненно.
Чувствительность РПГА составляет 76% при первичном сифилисе; 100% при вторичном сифилисе; 97% при скрытом сифилисе; 94% при позднем сифилисе. Специфичность РПГА выше, чем специфичность РИФ–абс, составляет 99%.
Благодаря соотношению высокой специфичности, чувствительности, простоты выполнения, стандартизации реагентов среди трепонемных тестов для серодиагностики сифилиса РПГА стабильно занимает лидирующее место в клинической практике в мире.
Особые преимущества ИФА заключаются: в высокой чувствительности и специфичности метода; автоматизации постановки реакции; высокой степени стандартизации; возможности исследования большого количества образцов сывороток; в количественном учете и объективной документации полученных результатов; возможности одновременного определения титра противотрепонемных АТ разных классов (IgG и IgM) в одном образце; пригодности для ранней диагностики сифилиса и диагностики врожденного сифилиса; в удобстве применения для тестирования крови в службе переливания крови; применимости в качестве подтверждающего специфического трепонемного теста. Чувствительность ИФА 98–100%, специфичность 96–100%.
К недостаткам ИФА можно отнести: непригодность для исследования единичных образцов; более длительный срок до получения результата, и меньший срок годности ИФА-наборов, например, по сравнению с РПГА.
Иммунный блот (ИБ). Одним из современных методов диагностики сифилиса является ИБ для определения АТ IgG либо IgM к определенным АГ бледной трепонемы.
Метод обладает высокой чувствительностью (до 100%,), специфичностью (98%) и воспроизводимостью (100%). Исследование дает возможность изучения спектра АТ сразу к нескольким АГ T.pallidum, применения высокоочищенных рекомбинантных и пептидных АГ, снижающих до минимума неспецифическую реактивность сывороток.
Все это определяет возможность предпочтения применения метода ИБ перед другими трепонемными тестами для верификации диагноза сифилиса в сложных случаях, в частности, для диагностики сифилиса во второй половине инкубационного периода, скрытого врожденного сифилиса в первые дни жизни ребенка, для выявления скрытого сифилиса у лиц со слабым гуморальным ответом, а также для дифференцирования ложноположительных результатов других тестов.
К вопросу об истинной и ложной серопозитивности серологических тестов на сифилис в практике дерматовенеролога
Диагностика сифилиса базируется на данных анамнеза и конфронтации, клинических проявлениях, обнаружении возбудителя в отделяемом элементов сыпи у больных первичным и вторичным сифилисом и результатах классических серологических реакций (КСР). Именно классические серологические реакции в практической деятельности дерматовенеролога являются повседневными, обязательными и исключительно важными тестами, позволяющими распознать сифилис на любой его стадии. Доказано, что течение сифилиса с самого его начала может быть скрытым, без смены периодов и с отсутствием клинических проявлений и протекать таким образом неопределенно долго, иногда всю оставшуюся жизнь. В этих случаях, когда нет никаких подозрений в отношении сифилиса, в том числе и у заболевшего, серологическое исследование крови является единственным достоверным методом его диагностики.
В практике дерматовенеролога нередко встречаются сложные ситуации, когда необходимо дифференцировать истинную серопозитивность классических серологических реакций, обусловленную сифилисом, с ложной, вызванной другими причинами (не сифилисом). Это имеет особую значимость при диагностике скрытых форм сифилиса (раннего, позднего, неуточненного). Однако при целом ряде заболеваний, ничего общего с сифилисом не имеющих, классические серологические реакции могут быть положительными. Это так называемые ложноположительные серологические реакции (ЛПР).
Вопрос о толковании таких результатов и тактике врача-дерматовенеролога по отношению к данным пациентам имеет большое практическое значение. Наша повседневная практика показывает, что «авторитет» классических серологических реакций настолько высок, что врачи многих специальностей, в том числе и дерматовенерологи, находятся в «плену» их показателей. Зачастую не только пациенты, но и некоторые врачи с положительными результатами серологических реакций связывают наличие сифилиса у обследуемого. Подобная позиция специалиста может привести к ложной диагностике сифилиса, причинить психологическую травму пациенту и членам его семьи.
Вот почему так пессимистично прозвучало высказывание А. С. Залманова: «Сколько здоровых людей было объявлено сифилитиками только на основании положительной реакции Вассермана!» (1966). Это высказывание не потеряло своей актуальности и в наше время в связи с тем, что в РБ масштабы серологического обследования достаточно велики, ибо подвергаются обязательному серологическому тестированию значительные контингенты населения:
Согласно известным к настоящему времени фактам, ложноположительные серологические реакции на сифилис могут быть обусловлены различными экзо- и эндогенными причинами, в том числе техническими погрешностями, связанными с забором крови для исследования и ее доставкой в лабораторию, хранением и использованием диагностических препаратов, постановкой серореакций, перекрестной реактивностью, связанной с антигенным сходством микроорганизмов, нарушением обмена (белкового, липидного), сопровождающего соматическую патологию, состоянием вторичного иммунодефицита.
Неспецифическую позитивность указанных трепонемных тестов связывают с соматической патологией:
а также со случаями, когда сыворотка здоровых лиц может содержать антитрепонемные антитела. Поэтому в условиях практической работы тактика дифференцирования ложноположительных серологических реакций, в том числе и трепонемных тестов, от истинного заболевания сифилисом не проста и должна отличаться гибкостью и индивидуальным подходом к каждому такому пациенту, клиническим осмыслением результатов классических серологических реакций, РИФ и реакции иммобилизации бледных трепонем в каждом конкретном случае.
Сохраняющаяся в РБ сложная ситуация с заболеваемостью сифилисом, актуальность вопроса истинной и ложной серопозитивности серологических тестов на сифилис побудила нас проанализировать случаи ложноположительных серологических реакций на материалах Бобруйского кожно-венерологического диспансера, попытаться рассмотреть принципы и критерии дифференциальной диагностики, дать рекомендации практикующим дерматовенерологам.
Материалы и методы
Нами был проведен анализ амбулаторных карт 50 пациентов с острыми и хроническими ложноположительными серологическими реакциями, состоявших на диспансерном учете в 1995-2005 гг. (табл. 1).
Таблица 1.
Распределение пациентов с ложноположительными серологическими реакциями по полу и возрасту
| Возраст, лет | 18-20 | 21-30 | 31-40 | 41-50 | 51-60 | 61-70 | > 70 |
| Мужчины | — | — | 1 | 3 | 2 | 5 | 5 |
| Женщины | 2 | 6 | 8 | 5 | 4 | 6 | 3 |
| Всего | 2 | 6 | 9 | 8 | 6 | 11 | 8 |
Результаты и их обсуждение
Таблица 2.
Распределение пациентов с острыми и хроническими ложноположительными серологическими реакциями по степени позитивности реакции связывания комплемента с кардиолипиновым и/или трепонемным антигенами
| Степень позитивности | Острые ложнополо- жительные серологические реакции | Хронические ложнополо- жительные серологические реакции | Итого |
| Сомнительная (1+) | 2 | 5 | 7 (14%) |
| Слабоположительная (2+) | 10 | 9 | 19 (38%) |
| Положительная (3+) | 5 | 8 | 13 (26%) |
| Резкоположительная (4+) | 7 | 4 | 11 (22%) |
| Всего | 24 | 26 | 50 |
При дообследовании были выявлены:
Трое обследованных не указали на перенесенные в прошлом заболевания и не имели сопутствующей патологии.
Из 9 беременных с ложноположительными серологическими реакциями у 2 степень позитивности реакции связывания комплемента составила 2+ (слабоположительная), у 2 — 3+ (положительная), у 5 — 4+ (резкоположительная). Следует отметить, что у 5 беременных и ранее при предыдущих беременностях отмечалась ложная серопозитивность, а у 6 в процессе динамического серологического наблюдения наступила спонтанная негативация классических серологических реакций спустя 2-6 месяцев после окончания беременности (роды или искусственное прерывание).
В процессе диспансеризации пациентов с ложноположительными серологическими реакциями у 6 (12%) был установлен рак различной локализации спустя 1-4 года с момента наблюдения (все старше 60 лет). Можно предположить, что ложноположительные серологические реакции у этих пациентов явились косвенными ранними маркерами онкологической патологии.
Микрореакция преципитации с кардиолипиновым антигеном была отрицательной у 2, слабоположительной — у 11, положительной — у 20, резкоположительной — у 17, титры сывороток 1:8 — у 8, 1:16 — у 7, 1:32 — у 2 пациентов. При исследовании крови в иммуноферментном анализе у 37 обследованных отрицательный результат совпал с отрицательными результатами РИФ и реакций иммобилизации бледных трепонем. Благодаря высокой специфичности, иммуноферментный анализ может служить наряду с РИФ и реакцией иммобилизации бледных трепонем референс-тестом в сложных случаях дифференциальной диагностики скрытого сифилиса и ложноположительных серологических реакций.
Новолодский В. Л., Копыленко Е. М., Новолодский А. В. Бобруйская центральная больница.
Опубликовано: журнал «Медицинская панорама» № 5, май 2006 года.
Диагностика сифилиса
Diagnosis on syphilis
Как ставится диагноз сифилиса
Диагноз сифилиса ставиться на совокупности данных анамнеза,конфронтации,клинической картины и лабораторных данных,включающих обнаружение возбудителя и результатов серологического обследования.Подтверждение диагноза лабораторными данными обязательно.
